Bu veb saytda çerezlərdən istifadə edir ki, mümkün olan ən yaxşı istifadəçi təcrübəsini təmin edə bilərik. Cookie məlumatları brauzerinizdə saxlanılır və veb saytımıza qayıtdıqda və sizi maraqlandıran və faydalı olan saytın hansı bölmələrini anlamaqda kömək etmək üçün sizi tanıdığınız funksiyaları yerinə yetirir.
RDEB genini təmir etmək üçün CRISPR/Cas9
Gen redaktəsi genetik səhvləri düzəldə və DEB yaralarının sağalmasına kömək etmək üçün sağlam dəri greftləri yarada bilər.
Dr Sergio López-Manzaneda işləyir CIEMAT İspaniyada DEB-ə səbəb olan genetik dəyişiklikləri düzəltmək üçün bu gen tənzimləmə layihəsi. Bu layihənin məqsədi laboratoriyada yetişdirilən dəri hüceyrələrində kollagen-9 geninin (COL7A7) qırılan hissələrini bərpa etmək üçün yeni CRISPR/Cas1 texnologiyasından istifadə etməkdir. Bu genetik “yamaq” genin bir hissəsinin kəsilməsini və iş ardıcıllığı ilə “yamaq”ın daxil edilməsini nəzərdə tutur. Müvəffəqiyyətli olarsa, genetik olaraq yamaqlanmış dəri hüceyrələri gələcəkdə DEB yaralarını sağaltmaq üçün sağlam dərinin greftləri yaratmaq üçün istifadə edilə bilər.
Daha ətraflı tədqiqatçımızın bloqunda oxuyun.
Maliyyələşdirməmiz haqqında
Tədqiqat rəhbəri | Dr Sergio López-Manzaneda |
Müəssisə | Jiménez Díaz Vəqfi, CIEMAT, İspaniya |
EB növləri | DEB |
Xəstə cəlb | Yox |
Maliyyələşdirmə məbləği | £15,000 |
Layihənin uzunluğu | 1 il |
Başlanğıc tarixi | 1 Yanvar 2024 |
DEBRA daxili ID | GR000042 |
Proje detayları
Layihənin yarısında tədqiqatçılar öz mərhələlərinin yarısına uğurla çatdıqlarını bildirirlər. Onların genetik “yamaqları” gözləniləndən daha səmərəli işləyir, lakin daha kiçikdir. Bu o deməkdir ki, onların daha çox ehtiyacı olacaq və layihənin ikinci yarısı üçün buna diqqət yetirəcəklər.
Aparıcı tədqiqatçı: Dr Sergio López-Manzaneda CIEMAT-da genom redaktoru sahəsində güclü təcrübəyə malik tədqiqatçıdır.
Tədqiqatçılar: Dr Fernando Larcher Universidad Carlos III de Madrid-də biokimya üzrə dosent və CIEMAT-da (Epitelial Biotibb Şöbəsi) şöbə müdiridir.
Alex Bassons Bascuñana CIEMAT-da Biotibbi İnnovasiya Bölməsinin Epiteliya Biotibb Qrupunda PhD tələbəsidir.
Əməkdaşlıq: Doktor Paula Rio əsas elmdən klinik sınaqlara qədər irsi hematopoetik xəstəliklərin gen redaktəsi və gen terapiyası sahəsində beynəlxalq səviyyədə tanınmış mütəxəssisdir.
“Bu qeyri-viral gen redaktə yanaşması hər bir məlum mutasiyaya cavab verə bilən alətlər kitabxanası yaratmaq üçün ucuz və universal strategiya axtarır... Gələcək klinikadan əvvəlki tədqiqatlarda xəstələrin genləri ilə düzəldilmiş keratinositlər və fibroblastlar istifadə olunacaq. biomühəndisləşdirilmiş dəri ekvivalentləri yaratmaq.
- Doktor Sergio López-Manzaneda
Qrant adı: COL7A1-in qeyri-viral genom redaktə yamağı.
Bu layihədə biz yalnız bir nöqtəli mutasiyaya deyil, həm də RDEB-ə səbəb olan qonşu mutasiya qruplarına, onları saxlayan tam eksonları təmir etməklə müalicəyə yönəlmiş genomun redaktə strategiyasını təklif edirik. Bu “genetik yamaq” CRISPR/Cas9 sistemi tərəfindən asanlaşdırılan təbii Homoloji Rekombinasiya (HR) DNT təmir mexanizminə əsaslanır. “Yamalar” kiçik (300-400 baza cütü) ikiqat zəncirli HDR donor DNT şablonlarını təmsil edir ki, onlar bir neçə bitişik ekzonu əhatə edəcək qədər gen ardıcıllığından tərtib ediləcək, bu halda VII tip kollageni kodlayan COL7A1 geninə uyğundur. Məqsədimiz fərdi mutasiya qrupları ilə mübarizə aparmaq üçün xüsusi yamaqların olması ideyası ilə bu texnologiyanın istifadəsini xarakterizə etmək (effektivlik, təhlükəsizlik) və standartlaşdırmaqdır. Ex vivo RDEB xəstə hüceyrəsi müalicəsi üçün təklif olunan qeyri-viral texnologiya onun klinikaya ucuz qiymətə tərcüməsini asanlaşdıracaq.
EB üçün ən perspektivli terapevtik yanaşmalardan biri CRISPR/Cas9 texnologiyalarından istifadə edərək genomun redaktə edilməsidir. Son 7 il ərzində laboratoriyamız bu sahədə fəal işləyir və nəticələrini klinikaya çevirmək məqsədi daşıyan güclü konsepsiya sübutu məlumatları təqdim edir. Avropa Dərman Agentliyi tərəfindən Yetim Dərman təyinatını əldə edən bu yanaşmalardan biri ilə klinik tətbiq ərəfəsindəyik. (AB/3/20/2253), biz daha səmərəli, daha təhlükəsiz və klinik cəhətdən uyğun genom redaktə strategiyaları axtarmağa davam edirik.
Bu layihədə biz viral vektorların istifadəsini tələb etməyən yenilikçi gen redaktə yanaşmasını sınaqdan keçirməyi təklif edirik (bütün material tək elektroporasiya ilə təqdim olunur). Məqsəd bu genetik bölgəni CRISPR/Cas9 texnologiyası ilə kəsdikdən sonra mutasiyaya uğramış bölgələri düzəltmək üçün bu “genetik yamaqlardan” istifadə etməkdir. Biz dörd müxtəlif “yamaq” hazırlamışıq, yəni HDR-yə üstünlük vermək üçün provayderimizin xüsusi texnologiyası (İnteqrasiya edilmiş DNT texnologiyaları, IDT) tərəfindən sonlarında xüsusi olaraq dəyişdirilmiş dsDNA donor şablonları. Bu şablonlarda iki ekson və onların ətrafı (73 və 80, hər biri iki "yamaq") və dörd fərqli kəsmə nöqtəsi (ekson 73 üçün iki və 80 üçün iki) var. Bu şablonlar (təxminən 300-400 bp) qonşu ekzonları da əhatə edir.
Biz mutasiya qruplarını həll etməyə və ya sistem kifayət qədər yaxşı işlədiyi halda “yamaqlar” daxilində eksonları tam şəkildə düzəltməyə imkan verəcək “yamaqlar” daxilində təmirin həcmini qiymətləndirməyi hədəfləyirik. İnanırıq ki, bu roman, heç bir viral, fərdiləşdirilmiş gen redaktə strategiyası əhəmiyyətli dərəcədə aşağı iqtisadi xərclə klinikaya asanlıqla tərcümə edilə bilər.
Biz qrant mərhələlərinin yarısına uğurla çatdıq. Başlanğıcda, strategiyamız ekzon cütlərini əhatə etmək üçün DNT "yamaqlarından" istifadə edərək genomu yenidən yazmağı hədəfləmişdi (xüsusən ekzon cütlərində mutasiyaları hədəfləyir: 72-73, 73-74, 79-80 və 80-81). Ancaq istifadə etdiyimiz DNT yamaqlarının gözlədiyimizdən bir qədər fərqli olduğu ortaya çıxdı. Bu yamalar genomu 80%-dən çox səmərəliliklə yenidən yaza bilər ki, bu da əvvəllər bildiriləndən daha yüksəkdir, lakin onların fəaliyyəti dar bir pəncərə ilə məhdudlaşır. Bunu nəzərə alaraq, 2-ci mərhələ strategiyamız indi hər bir ekzon üçün fərdi DNT yamaqlarına diqqət yetirəcəkdir. Sağlam DNT ardıcıllığını dəyişdirməməyimizi təmin etmək üçün CRISPR/Cas9 “molekulyar kəsmə” yalnız mutasiyaya uğramış ardıcıllığı hədəf alacaq. Bu, hər bir mutasiya üçün xüsusi kiçik RNT tələb edəcək, halbuki hər bir ekson üçün ümumi bir DNT yaması istifadə edilə bilər. (2024-cü ilin iyul hesabatından).